Cas9做肺癌细胞的基因敲除用体外导入Cas9蛋白的效

发表时间:2019-10-08

  最近做到了肺癌细胞某段基因的敲除,前面的师兄师姐都是用的转cas9质粒进细胞表达的方式做的实验。老师让我试一下通过体外导入Cas9蛋白的方式来进行。有用过这个方法做的吗?是通过转...

  最近做到了肺癌细胞某段基因的敲除,前面的师兄师姐都是用的转cas9质粒进细胞表达的方式做的实验。老师让我试一下通过体外导入Cas9蛋白的方式来进行。有用过这个方法做的吗?是通过转染试剂直接导入吗?

  cas9,dcas9,cas12a,cas13a都有。这几个蛋白的区别有人知道吗?

  这要具体分析,如果这个基因存在可变剪接,那就看这个基因是否有外显子(不为三的整倍数的外显子)是这些转录本里共有的,如果是就可以在这个外显子上设计sgRNA,这样就可以敲除掉这个外显子和其后的外显子(因为移码突变导致的提前翻译终止)。如果没有这样的外显子那就只能在不同的外显子上设计多条sgRNA,NGA for iOS增魔兽英雄榜装备查看功能[2019-09-13]深圳前海中洲达基金管理有眼公司。然后筛选这几个转录本都敲除成功的细胞系或实验动物就可以了(毕竟应用Cas9技术能够实现多基因敲除)。


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